![\"\"解码=\"异步\"loading=\"lazy\"](\"https://topogen.com/wp-content/uploads "\\"研究套件\\"")
E 。大肠杆菌 DNA 旋转酶药物筛选试剂盒SKU：TG2001GKITC类别：药物筛选试剂盒标签：DNA 旋转酶、药物筛选、EC DNA 旋转酶、旋转酶说明试剂盒内容运输和存储资源
该试剂盒旨在筛选新型旋转酶靶向药物，可以是界面毒物（或诱导 DNA 裂解的 IFP）、催化抑制化合物（通过多种机制阻止旋转酶作用的 CIC）。它是一种易于采用的直接凝胶测定试剂盒。
DNA 超螺旋测定：该药物筛选试剂盒基于对所提供的松弛质粒 DNA 底物（pHOT1，它是pBR322），大约 2.7 KB。在 37oC 下，1 单位的旋转酶将在 1 小时内超螺旋 200-500 ng。该酶通过符号反转模型将负超螺旋引入松弛的 pHOT1 质粒底物中。完整的超螺旋反应需要能量辅因子（ATP）。非 EB 凝胶是检测旋转酶活性的理想选择，超螺旋和松弛 DNA 形式之间的出色分辨率证明了这一点。
药物筛选测定。该试剂盒旨在识别 IFP 和 CIC（分别为毒物和抑制剂）。典型的 IFP（例如氟喹诺酮）会诱导双链 DNA 断裂，而原型 CIC 将简单地阻止酶作用于松弛的 DNA（新生霉素，例如某些嵌入剂）。因此，IFP（环丙沙星）将导致线性 DNA 产物的形成，而 CIC 将阻断超螺旋活性。使用该试剂盒可以轻松检测到这些事件。
该试剂盒包含纯化至同质性的细菌（大肠杆菌）DNA 旋转酶（> 98%，基于 SDS-PAGE）。旋转酶由过表达菌株制备，并以 A2B2 复合物中的纯化全酶形式提供。酶以试剂盒随附的质量控制数据中给出的单位浓度提供。它还储存在稳定缓冲液中 [50 mM Tris-Cl pH 7.5、100 mM KCl、2 mM 二硫苏糖醇、1 mM EDTA、50% 甘油]。包括底物松弛 DNA（质粒 pHOT1）。
EC DNA 旋转酶测定药物试剂盒内容（100 次测定）1.松弛的 pHOT1 DNA（50 μg）
2。超螺旋 pHOT1 DNA（25 μl凝胶上样缓冲液）
3.线性化 pHOT1 DNA（25 μl，凝胶上样缓冲液）
4. 5x Gyrase 检测缓冲液（0.6 ml）
5.稀释缓冲液（0.6 ml）
6. 10x 凝胶上样缓冲液（0.3 ml）
7. 10x 蛋白酶 K（0.5 毫升）
8。 10% SDS（0.3 毫升）。
9.纯化的 DNA 旋转酶（100 单位）
10。环丙沙星 10 μg/ml (50 μl)
DNA 旋转酶质量控制对我们纯化的酶进行 QC 测试：1。通过分析线性动质体DNA和线性质粒DNA的形成来进行核酸酶污染测试。对 1 µg 链状 kDNA 或超螺旋 pUC19 DNA 进行孵育（37°C，10 mM MgCl2 存在下 4 小时）。在这些条件下不会产生线性DNA或分解产物。
2．根据 SDS-PAGE，A 和 B 亚基的纯度 >98%，并且经认证不含核酸内切酶。
3.注意：DNA 旋转酶输入水平较高时，可能会检测到少量线性 DNA，因为到自发中止的反应。这是正常现象，实际上可以作为线性 DNA 的内部标记。
该试剂盒通过干冰运输。收到后，DNA 和对照药物应储存在 4°C 下，缓冲液应储存在 -20°C 下。避免质粒频繁冷冻/解冻循环，因为这可能会导致 DNA 断裂。将酶储存在-70°C。我们还建议第一次解冻后将酶等分（重复冻/解冻可能会导致活性丧失）；酶活性在冰上可稳定保存 1-3 天。
TG2001G1-Kit-ProtocolGyr-Drug Screening Kit MSDS
您可能还喜欢...![](\"https://topogen.com/wp-content/uploads/2021/07/Relaxed-DNA-Super_Coiled-1200x1200-2-300x300.png”class)
Gyrase 检测试剂盒295.00 美元![\"EC](\"https://topogen.com/wp-content/uploads/2021/07/Relaxed)
大肠杆菌 DNA 旋转酶本文链接： http://topogen.immuno-online.com/view-1495871638.html
